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公司新聞

ELISA操作步驟(IFN-r)

ELISA操作步驟(IFN-r)

大鼠干擾素-r(IFN-r)定量EIA試劑盒使用說明

原理
本實驗采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的IFN-r與單抗結合,高靈敏檢測樣品中IFN-r的含量。
試劑盒組成
1. 48孔微孔板: 一塊
2. 樣品稀釋液:一瓶 6ml
3. **抗體工作液:一瓶 4ml
4. 酶標抗體工作液: 一瓶 6ml
5. 終止液:一瓶 6ml
6. 洗滌液(25 x):一瓶 25ml
7. 標準品:一管/二管 用前加樣品稀釋液250ul溶解,溶解后4度可保存一周
8. 底物液A:一瓶 6ml
9. 底物液B:一瓶 6ml
10. 坐標紙: 一張
11. 封板紙 一張
準備試劑與收集血樣
1. 洗滌液:用重蒸水1:25稀釋
2. 收集血液標本:采集血清盡早檢測,2-8oC保存**;需更長時間須冷凍(-20 oC)保存,避免反復凍融。
檢測程序
1.建立標準曲線:設標準孔8孔,每孔中各加入樣品稀釋液100ul,**孔加標準品100ul,混勻后用加樣器吸出100ul,移至**孔。如此反復作對倍稀釋至第六孔,*后,從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對照,第八孔為零孔。
2. 加樣:待測品孔每孔各加入待測樣品100ul混勻。
3. 將反應板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
5. 每孔(除零孔)加**抗體工作液50ul,置37℃ 60分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔(除零孔)加酶標抗體工作液100ul(兩滴),將反應板置37 oC 60分鐘。
8. 洗板:同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反應15分鐘。
10. 每孔加入1滴終止液混勻。
11. 在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除零孔值后再行計算。
2. 以標準品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0pg/ml之OD值在雙對數紙上作圖,畫出標準曲線。通過標本的OD值可以在標準曲線上查出其濃度。或使用計算機軟件,繪制出標準曲線,計算樣品含量。
注意事項
1. 以上標準孔及待查樣品均建議做復孔,每次測定應同時制作標準曲線。
2. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。有效期6個月。
3. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用,溶液應輕輕搖勻后使用。
4. 本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含疊氮化鈉的廢物混在一起。
5. 板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
6. 本試劑盒僅供研究用。

 

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