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豬血管內皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

上海西唐生物科技有限公司  021-55229872,  65333639  www.westang.com

豬血管內皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

 (用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)

 

原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗豬 VEGF 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 VEGF與單抗結合,加入生物素化的抗豬VEGF,形成**復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,*后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,VEGF濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中VEGF濃度。

試劑盒組成2-8保存)

酶標板(Coated Wells

96

酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標準品(Standards):40ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

**抗體工作液(Biotinylated Antibody

12ml

終止液Stop Solution

12ml

準備試劑與收集血樣

1.         收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃-70 ℃)保存,避免反復凍融。

2.         標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液設標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,**至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至**管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

3.         10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4.     洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

檢測程序

1.         加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37120分鐘。

2.         洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

3.         每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置3760分鐘。

4.         洗板:同前。

5.         每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3730分鐘。

6.         洗板:同前。

7.         每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。

8.         每孔加入100ul終止液混勻。

9.         30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1.         所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2.         以標準品40002000100050025012562.50 pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

3.         根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應VEGF含量。

試劑盒性能

        1.   靈敏度*小的VEGF 檢測濃度小于30pg/ml

2.   特異性:可同時檢測重組或天然的豬VEGF不與豬其它細胞因子有交叉反應。

3.   重復性:板內、板見變異系數均小于10%。

注意事項

        1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。

 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致**度誤差及OD值錯誤地升高。

        3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥

        4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷。

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