大鼠轉化生長因子-?(TGF-?)ELISA試劑盒
(產品貨號：F16919)
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 TGF-?單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 TGF-?與單抗結合，加入生物素化的抗大鼠TGF-?，形成**復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，*后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，TGF-?濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中TGF-?濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
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酶標板（Coated Wells）
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96孔
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酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate）
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12ml
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10×標本稀釋液（Sample Buffer）
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12ml
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20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）
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50ml
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標準品（Standards）：20ng/ml
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1瓶
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底物工作液（TMB Solution）
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12ml
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**抗體工作液（Biotinylated Antibody）
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6ml
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終止液（Stop Solution）
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12ml
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準備試劑與收集血樣
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10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
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收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。
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標準品液配制：取8個1.5ml離心管，**管加標本稀釋液900ul，**至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標準品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至**管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
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洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
標本激活方法
1. 將340ul標本稀釋液加入到一支1.5ml進口聚丙烯管中,再加20ul血清或血漿或組織標本。
2. 加20ul 1 N HCI,蓋緊，上下混勻。2－8℃放置60± 2分鐘。
3. 加20ul 1 N NaOH,蓋緊，上下混勻。
4. 即用，或放-20/-70℃保存3天。計算結果時乘以稀釋倍數20。（注意：不同的標本TGF-β的水平可能有較大差異，請根據實際情況靈活掌握稀釋度）
5. 細胞培養上清2倍稀釋(60ul的標本稀釋液＋100ul樣本＋20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH)。
6. 尿液直接活化1.4倍稀釋（100ul尿液＋20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH）
7. 加樣前務必用吸頭吹打混勻！
檢測程序
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加樣：每孔各加入標準品或待測樣品(已激活)100ul，將反應板充分混勻后置37℃40分鐘。
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洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
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每孔加入蒸餾水和**抗體工作液各50ul(空白加100ul水)。將反應板充分混勻后置37℃20分鐘。
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洗板：同前。
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每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃10分鐘。
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洗板：同前。
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每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。
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每孔加入100ul終止液混勻。
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30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
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所有OD值建議減除空白值后再行計算。如空白OD低于0.1，也可以直接計算。
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以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，使用軟件取四參數多項式作圖，畫出標準曲線。
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根據樣品OD值計算出相應TGF-?含量，再乘上稀釋倍數即可。軟件可以向本公司郵件索取。
試劑盒性能
1. 靈敏度：*小的TGF-? 檢測濃度小于15pg/ml。
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特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠TGF-?。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。
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重復性：板內、板間變異系數均小于10％。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致**度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 檢測時所有試劑都要恢復到室溫。板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現絮狀物，屬正常現象，不影響結果判讀。
5. 說明書中試劑盒組成為96T的量，48T的量應減半！
6. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！
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